1、测量仪器 常用检流计或电位计。

  目前使用较普遍的分光光度计为72型、721型和751型以及7230型。

  721型分光光度计波长范围360-800nm。其光学系统如图6.13所示。

721型分光光度计光学系统示意图

  由光源发出的可见光射到聚光透镜上,经平面镜转角90°,通过入射狭缝到准直镜。准直镜是一块圆形凹面反射镜,光线在准直镜上反射后,就以一束平行光射向棱镜,棱镜的背面镀铅,经棱镜色散后的光在铝面上反射再回到准直镜,再经准直镜反射后聚在出口狭缝上,在出光狭缝后得到一定波长的单色光。单色光通过液槽和光量调节器,射到真空光电管上转变为电信号,经放大器放大后,在检流计上直接读出吸光度百分透光度。

  751型分光光度计波长范围200-1000nm,即从紫外区到近红外区。其光学系统如图6.14。此仪器有氢灯和钨丝灯两种光源。在波长200-320nm范围内用氢灯;在波长320-1000nm范围内用钨丝灯。以石英棱镜作为单色器。用光电管作接受元件,配有紫敏光电管和红敏光电管两种。前者适用于波长200-625nm范围,后者适用于625-1000nm范围。此仪器配有玻璃和石英两种液槽,分别适用于可见光区和紫外光区。

751型分光光度计光学系统示意图

  2、定量方法

  主要应用工作曲线法(标准曲线法)作分光光度法的定量方法、根据物质对光选择吸收的性质,先测出该物质的吸收曲线,以求得合适的入射光波长λ。然后,根据朗伯-比尔定律,以溶液浓度与吸光度的直线关系作工作曲线。为此,用已知标准物质作标准系列,其浓度依次为c1,c2,c3,c4...,由小到大。在λ波长照射下,测得相应的吸光度A1,A2,A3,A4...,以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,作出工作曲线。最后将待测溶液在λ波长下测出吸光度Ax,在工作曲线上查出cx