在进行比色和分光光度测定时，首先要利用显色反应将待测组分转变为有色物质，然后再进行测定。因此，选择合适的显色反应和严格控制反应条件非常重要。
1、显色反应的选择 显色反应分两大类，一类是配合反应，另一类是氧化还原反应。其中配合反应是主要的。测定中，待测组分能与多种显色剂进行不同的显色反应生成不同的有色物质，选择显色剂和显色反应应满足如下要求：
（1）、灵敏度高。
（2）、选择性好。选择干扰较少或易于除去干扰的反应。
（3）、反应生成的有色化合物组成稳定，化学性质稳定。
（4）、显色剂在测定波长处无明显吸收。
显色剂分无机显色剂和有机显色剂。一般无机显色剂与待测物质的显色反应，很难满足以上条件，因而除硫氰酸盐、钼酸铵及过氧化氢少数几种外，目前应用的不多。有机显色剂以配合剂为多，显色反应多为配合反应。反应的选择性和灵敏度都较无机显色反应高，因而它广泛应用于吸光光度法中。正是由于有机显色剂的研制和应用，推动了吸光光度法的应用和发展。有机显色剂的种类繁多，常用的如双硫腙、邻二氮杂菲、丁二酮肟、二乙氨基二硫代甲酸盐等。
2、测定条件的选择
为了使比色及分光光度法有较高的灵敏度和准确度，应注意适当的光度测量条件，主要应考虑一下几点：
（1）、入射光波长的选择 如前所述，为了使测定结果有较高的灵敏度，一般情况下，入射光波长应选择待测溶液有最大吸收的波长。但是，当有干扰物质存在时，若干扰物质在该波长处有强烈的吸收，则必须另一灵敏度稍低但能消除干扰的波长作为入射光。
（2）、控制适当的吸光度范围 从仪器测量误差考虑，为了使测定结果有较高的准确度，一般应控制吸光度0.2-0.7，为此应控制标准溶液和待测溶液的浓度，并选择适当厚度的比色皿。
（3）、选择适当的参比溶液 参比溶液也称为空白溶液。在光度测量中，除利用参比溶液调节仪器的零点以为，还可消除比色皿器壁及溶剂对入射光的反射和吸收带来的误差。因此参比溶液的作用是非常重要的。
参比溶液的选择应按不同情况分别对待。当试液及显色剂均无色时，可用蒸馏水作为参比液;如果显色剂无色，而被测试液中存在其他有色离子，可采用不加显色剂的被测试液作为参比液;如果显色剂和试液均有颜色，可在一份试液中加入适量的掩蔽剂，将被测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂作用。显色剂与其他试剂均按试液测定方法加入，以此作为参比液，这样可以消除显色剂及一些共存离子的干扰。总之，选择参比液的原则是，使试液的吸光度真正反映待测物质的浓度。