(1)乳糖发酵试验 该试验根据大肠菌群能发酵乳糖并产酸产气的生化特性来进行。将水样接种于含乳糖的液体培养基,37℃培养24h后,观察产酸产气情况,若产酸产气则为阳性反应。由于水中除大肠菌群外,还有一些也能发酵乳糖并产酸产气的非大肠菌群细菌,因此阳性反应只能推测大肠菌群存在的可能性,需要进一步做确定试验。

  (2)分离培养 该试验包括鉴别和镜检两部分,是根据大肠菌群在鉴别培养基上生长并形成典型菌落、革兰氏染色阴性和无芽孢的特征来进行的。将推测试验中呈阳性反应的菌液接种于伊红美蓝培养基或远藤氏培养基。这类培养基能抑制非大肠菌群细菌的生长,而有利于大肠菌群的生长并形成典型特征的菌落。大肠菌群在伊红美蓝培养基上的典型菌落特征是:①深紫黑色,具有金属光泽;②紫黑色,不带或略带金属光泽;③边缘淡紫红色,中心深紫色。大肠菌群在远藤氏培养基上典型的菌落特征是:①紫红色,具有金属光泽;②深红色,不带或略带金属光泽;③边缘淡红色,中心深红色。

  接种于上述培养基上的细菌37℃培养24h后,若有大肠菌群典型菌落形成,则对典型菌落的细菌进行革兰氏染色,经镜检证实为甘兰氏染色阴性无芽孢杆菌,可初步确定有大肠菌群存在,但还要作验证试验。

  (3)证实试验 该试验主要验证革兰氏阴性无芽孢杆菌能否使乳糖发酵并产酸产气。从确定试验中选取一些证实为甘兰氏阴性无芽孢杆菌的菌落,接种于乳糖液体培养基中,经37℃培养24h。若产酸产气,即证实有大肠菌群存在。

  根据证实为总大肠菌群阳性的管数查MPN检索表,报告每100mL,水样中的总大肠菌群MPN值。如所有乳糖发酵管均阴性时可报告未检出总大肠菌群。