凡应用标准曲线的分析方法,都是在样品测得信号值后,从标准曲线上查得其含量(或浓度)。因此,能否准确绘制标准曲线,将直接影响到样品分析结果的准确与否。此外,校准曲线亦确定了方法的测定范围。

  1、标准曲线的绘制:

  1)对标准系列,溶液以纯溶剂为参比进行测量后,应先用空白校正,然后绘制标准曲线。

  2)标准溶液一般可直接测定。但如试样的前处理较复杂致使污染或损失不可忽略时,应和试样同样处理后再测定。

  绘制标准曲线应注意:

  ①标准曲线一般可根据4-6个浓度及其测量值信号值绘制。

  ②测量信号值的徐晓分度应与纵坐标的最小分格相适应。如在光度分析中,前者的0.05吸光度相当于后者的一小格,以使二者的读数精度相当。

  ③浓度的整数值应落在横坐标的中格或大格的粗线上,以便于分小格查阅。并尽量使标准曲线的几何斜率接近于1(与横轴约成45°角),以便在两个轴上的读数误差相近。

  ④标准曲线的斜率常因温度、试剂批号等条件的变化而改变,在测定未知样品的同时测绘标准曲线是最理想的。否则,应在测定未知样品的同时,平行测定线性范围内中等浓度标准溶液和空白溶液各两份,取均值相减后,与以前绘制的标准曲线上相同点进行核对,二者的相对差值根据方法精度要求<5%-10%,否则应重新绘制标准曲线。

  2、标准曲线的相关系数 绘制标准曲线所依据的两个变量的线性关系,决定着标准曲线的质量和样品测定结果的准确度。影响标准曲线线性关系的因素有下列几点:

  1)分析方法本身的精密度。

  2)分析仪器的精密度。包括与分析仪器联用的电源稳压器,记录仪或积分以及仪器附件如比色皿等的质量。

  3)量取标准溶液所用量器的准确度,如10mL分度吸管的每毫升分度是否都经过检定。

  4)易挥发溶剂的挥发所造成的比色液体积的变动幅度。

  5)分析人员的操作水平等等。

  3、标准曲线的检验

  1)线性检验 为了定量判断标准曲线的线性关系,可用“相关系数”进行考查。如对于用4-6个浓度的标准溶液及其测量信号值绘制的标准曲线,根据实践经验,应力求其相关系数的绝对值∣r∣≥0.999,否则,可参照上述影响线性关系的诸因素,找出原因并尽可能加以纠正,重新测定和绘制新的标准曲线。

  2)截距检验 即检验标准曲线的准确度。在线性检验合格的基础上对其进行线性回归,得出回归方程y=a+bx,然后将所得截距a与0作t检验,当取95%置信水平、经检验无显著性差异时,a可作0处理,方程简化为y=bx。移项得x=x/b;在线性范围内,可代替查询标准曲线,直接将样品测量信号值经各自校正后,计算出试样浓度。

  当a与0有显著性差异时,即表示代表标准曲线的回归方程得计算结果准确度不高,应找出原因并予以纠正后,重新绘制标准曲线并经线性检验合格,再计算同归方程,经截距检验合格后投入使用。

  回归方程如不经上述检验和处理,即直接投入使用,必将给测定结果引入差值相当于截距a的系统误差。

  3)斜率检验 即检验分析方法的灵敏度。方法灵敏度是随实验条件的变化而改变的。在完全相同的分析条件下,仅由于操作中的随机误差所导致的斜率变化不应超出一定的允许范围。此范围因分析方法的精度不同而异,例如,一般而言,分子吸收分光光度法要求其相对差值小于5%,而原子吸收分光光度法则要求其相对差值小于10%等等。