水质监测中实验6-培养基的制备与灭菌操作练习的实验内容与步骤

  (1)、常用玻璃器皿的包装与灭菌

  1)、将洗涤干净并晾干的培养皿按实验所需套数用牛皮纸包装。

  2)、移液管的吸端用钢丝塞入少许棉花,成为长1-1.5cm的面塞(以防止细菌吸入口中,也避免将口中细菌吹入管内),棉花要塞得松紧适宜,吸时既能通气又不致使棉花滑动。用4-5min宽的长纸条从移液管的尖端开始紧紧将移液管全部包裹起来,余下的纸头折叠打结,如实验图1所示。按照实验需要,可单支或多支包装。

  (2)、培养基的制备

  1)、营养琼脂培养基的配方

  牛肉膏:0.3-0.5g        琼脂:1.5-2g        蛋白胨:1.5g

  蒸馏水:100mL           NaCl:0.5g          pH:7.4-7.6

  2)、制备步骤

  ①调配   按培养基配方准确称取各成分,置于烧杯中,用少量水溶解。

  ②溶化   各成分混匀于水中加热溶化,注意随时搅拌并防止外溢,溶化完毕,要补足失去的水分。

  ③调整pH值   调节pH值在6.8-7.2之间,但在高压灭菌后,pH值约降低0.1-0.2,故校正时应比实际需要的pH值高0.1-0.2(除非特殊需要,最好不要用有机酸来调节pH值)。

  ④过滤   用纱布或滤纸过滤。若培养基杂质很少或实验要求不高,可不过滤。

  ⑤分装   根据需要将培养基分装于不同容量的锥形瓶和试管中,分装量不宜超过容器的2/3,以免灭菌时外溢。其中,中号试管每管分装量约为管高的1/5,灭菌后制成斜面培养基;大号试管每管分装量为15mL,灭菌后以备制作平板;其余全部倾入250mL锥形瓶,灭菌后以备制作平板。

  ⑥包装   塞好硅胶塞并包扎。锥形瓶单独包扎,试管可以多支一齐包扎。包扎前要贴上标签,标签上写明培养基名称和配制日期。

  ⑦灭菌   温度121℃压力98.1kPa高压蒸汽灭菌15min(不宜高压蒸汽灭菌的糖类培养基可降低温度、延长灭菌时间,或用滤膜过滤灭菌)。

  ⑧无菌检验   取其中1-2支试管与培养箱37℃培养24h,证实无菌;同时再用已知菌种检查在此培养基上的生长情况,符合要求方可用。