水质监测中实验6-培养基的制备与灭菌操作练习的实验内容与步骤

　　(1)、常用玻璃器皿的包装与灭菌

　　1)、将洗涤干净并晾干的培养皿按实验所需套数用牛皮纸包装。

　　2)、移液管的吸端用钢丝塞入少许棉花，成为长1-1.5cm的面塞(以防止细菌吸入口中，也避免将口中细菌吹入管内)，棉花要塞得松紧适宜，吸时既能通气又不致使棉花滑动。用4-5min宽的长纸条从移液管的尖端开始紧紧将移液管全部包裹起来，余下的纸头折叠打结，如实验图1所示。按照实验需要，可单支或多支包装。

　　(2)、培养基的制备

　　1)、营养琼脂培养基的配方

　　牛肉膏：0.3-0.5g 琼脂：1.5-2g 蛋白胨：1.5g

　　蒸馏水：100mL NaCl：0.5g pH：7.4-7.6

　　2)、制备步骤

　　①调配按培养基配方准确称取各成分，置于烧杯中，用少量水溶解。

　　②溶化各成分混匀于水中加热溶化，注意随时搅拌并防止外溢，溶化完毕，要补足失去的水分。

　　③调整pH值调节pH值在6.8-7.2之间，但在高压灭菌后，pH值约降低0.1-0.2，故校正时应比实际需要的pH值高0.1-0.2(除非特殊需要，最好不要用有机酸来调节pH值)。

　　④过滤用纱布或滤纸过滤。若培养基杂质很少或实验要求不高，可不过滤。

　　⑤分装根据需要将培养基分装于不同容量的锥形瓶和试管中，分装量不宜超过容器的2/3，以免灭菌时外溢。其中，中号试管每管分装量约为管高的1/5，灭菌后制成斜面培养基；大号试管每管分装量为15mL，灭菌后以备制作平板；其余全部倾入250mL锥形瓶，灭菌后以备制作平板。

　　⑥包装塞好硅胶塞并包扎。锥形瓶单独包扎，试管可以多支一齐包扎。包扎前要贴上标签，标签上写明培养基名称和配制日期。

　　⑦灭菌温度121℃压力98.1kPa高压蒸汽灭菌15min(不宜高压蒸汽灭菌的糖类培养基可降低温度、延长灭菌时间，或用滤膜过滤灭菌)。

　　⑧无菌检验取其中1-2支试管与培养箱37℃培养24h，证实无菌；同时再用已知菌种检查在此培养基上的生长情况，符合要求方可用。