(1)、无菌水的制备

  在小号试管内盛9mL自来水,塞好硅胶塞,包扎以后经高压蒸汽灭菌后备用。无菌水常用于稀释水样。

  (2)、灭菌

  1)、干燥灭菌(热空气灭菌法)

  ①将包装好的待灭菌物品(培养皿、移液管等)放入干燥箱内。不要摆得太挤。

  ②关箱门,插上电源,启动开关,旋动恒热调节器至160℃。

  ③160℃恒温2h(由恒热调节器自动控制)。注意不超过170℃,以免包装纸被烤焦。

  ④2h后切断电源,待温度降至70℃以下,才能开箱门取出灭菌物品。

  2)、高压蒸汽灭菌法

  ①打开灭菌锅盖,向锅内加入适量的水,或从加水口处加水。

  ②将待灭菌的培养基和自来水放入锅内,不要太挤或紧靠锅壁,以免影响蒸汽的流通和冷凝水顺壁流入物品中,加盖旋紧螺旋,密闭。

  ③打开排气阀,加热,自开始产生蒸汽后约10min再关紧排气阀,此时蒸汽已将锅内的冷空气由排气孔排尽。若锅内冷空气未排尽,则达不到应有的温度,结果造成灭菌不彻底。

  ④待压力逐渐上升到所需压力时,开始计算灭菌时间,并控制热源,维持所需压力,以98.1kPa的压力、温度121℃灭菌15min。

  ⑤灭菌时间到达后,停止加热。

  ⑥待压力表指针降到“0”时,打开排气阀。注意切勿过早打开,否则可因骤然减压降温造成灭菌液体外溢和玻璃破碎。

  ⑦待排气孔无蒸汽排出,方可开锅盖,取出灭菌物品,将锅内剩余的水放掉。

  另外,含糖培养基一般是控制在65.7kPa(112℃)的压力,灭菌30min,以防高温破坏培养基的成分。