(1)、无菌水的制备
在小号试管内盛9mL自来水，塞好硅胶塞，包扎以后经高压蒸汽灭菌后备用。无菌水常用于稀释水样。
(2)、灭菌
1)、干燥灭菌(热空气灭菌法)
①将包装好的待灭菌物品(培养皿、移液管等)放入干燥箱内。不要摆得太挤。
②关箱门，插上电源，启动开关，旋动恒热调节器至160℃。
③160℃恒温2h(由恒热调节器自动控制)。注意不超过170℃，以免包装纸被烤焦。
④2h后切断电源，待温度降至70℃以下，才能开箱门取出灭菌物品。
2)、高压蒸汽灭菌法
①打开灭菌锅盖，向锅内加入适量的水，或从加水口处加水。
②将待灭菌的培养基和自来水放入锅内，不要太挤或紧靠锅壁，以免影响蒸汽的流通和冷凝水顺壁流入物品中，加盖旋紧螺旋，密闭。
③打开排气阀，加热，自开始产生蒸汽后约10min再关紧排气阀，此时蒸汽已将锅内的冷空气由排气孔排尽。若锅内冷空气未排尽，则达不到应有的温度，结果造成灭菌不彻底。
④待压力逐渐上升到所需压力时，开始计算灭菌时间，并控制热源，维持所需压力，以98.1kPa的压力、温度121℃灭菌15min。
⑤灭菌时间到达后，停止加热。
⑥待压力表指针降到“0”时，打开排气阀。注意切勿过早打开，否则可因骤然减压降温造成灭菌液体外溢和玻璃破碎。
⑦待排气孔无蒸汽排出，方可开锅盖，取出灭菌物品，将锅内剩余的水放掉。
另外，含糖培养基一般是控制在65.7kPa(112℃)的压力，灭菌30min，以防高温破坏培养基的成分。